Uchiha Itachi là anh trai ruột của Uchiha Sasuke, một người anh hết lòng thương yêu em trai mình.

Quãng thời gian hạnh phúc của hai anh em là khi còn nhỏ, họ thường quấn quýt chơi đùa bên nhau.

Lúc này, cuộc sống của Sasuke chỉ biết đến người anh trai Itachi. Cậu luôn muốn dành được sự chú ý của anh, cố gắng để được giỏi như anh, được cha công nhận như anh, cái gì cũng chỉ vì anh.

Itachi thường ấn nhẹ vào chán Sasuke và nói : “Thứ lỗi cho anh, Sasuke. Lần sau đi nhé!”. Lúc đó, Sasuke luôn thần tượng, tự hào về anh trai mình vì Itachi là một thiên tài,một niềm hy vọng của dòng tộc Uchiha.

Nhưng mọi thứ đã hoàn toàn thay đổi khi 2 anh em lớn lên, thời điểm mà Itachi xuống tay tàn sát cả gia tộc Uchiha, anh đã chẳng thể ra tay với đứa em trai mình hết mực yêu thương.

Chứng kiến cảnh cả gia tộc, cha mẹ bị chính người anh trai yêu quý sát hại, Sasuke đã căm ghét và muốn giết chết Itachi…

… thậm chí Sasuke còn quyết định rời bỏ làng Lá, đi theo Orochimaru để nâng cao thực lực của bản thân với mục tiêu duy nhất là đánh bại Itachi.

Mặc dù rất yêu thương đứa em trai bé bỏng nhưng Itachi vẫn gieo rắc hận thù vào Sasuke, tra tấn Sasuke bằng Magekyo Sharingan, thách thức cậu trở nên đủ mạnh để giết kẻ thù đã sát hại gia tộc – chính là Itachi và trở thành anh hùng của làng Lá, xây dựng lại gia tộc Uchiha.

Trước đó, Itachi biết được rằng Konoha muốn giết em trai mình, anh đã thỏa thuận với Đệ Tam để bảo vệ an toàn cho Sasuke. Ngoài ra, Itachi cảnh cáo Danzo không được làm hại Sasuke bằng không thì sẽ tố cáo hết những bí mật của Konoha mà anh biết cho các nước thù địch.

Ngay cả khi ở trong tổ chức Akatsuki, anh ta vẫn luôn tìm mọi cách để bảo vệ Sasuke. Bằng chứng là Itachi đã thâm nhập vào làng Lá sau cái chết của đệ Tam, mục đích thực sự không phải là bắt cóc Naruto - ninja đã bị phong ấn Cửu vĩ Hồ Ly mà là để nhắc nhở Danzo và 2 lão làng khác rằng anh vẫn còn sống, và họ không được hãm hại em trai của mình, Sasuke Uchiha.

Itachi đã bảo rằng anh để cho Sasuke sống sót chỉ để chiếm được cặp mắt của Sasuke và sở hữu Magekyo Sharingan vĩnh viễn nhưng trên thực tế Sasuke mới là người có được đôi mắt của Itachi.

Cuối cùng, sau khi giải hoàn toàn phong ấn của Orochimaru trên cơ thể Sasuke và tiêu diệt hắn, Itachi đã tiến đến gần Sasuke với bộ dạng như là sẵn sàng lấy đi con mắt của Sasuke…

…bất ngờ thay, anh đã cốc nhẹ lên trán Sasuke và nói "Xin lỗi Sasuke... đây là lần cuối cùng" giống hệt những lần anh gõ lên đầu Sasuke lúc hai người còn bé…

… đó là cách để anh truyền Amaterasu cho đứa em trai với hy vọng bảo vệ nó để không bị Tobi lợi dụng. Đây cũng là thời điểm Itachi trút hơi thở cuối cùng vì đau đớn và bệnh tật, cùng với sự hành hạ của tâm hồn.

Vì hòa bình của Konoha, và vì Sasuke, Itachi đã đồng ý được chết như một tên phản bội gia tộc và một kẻ tội phạm nguy hiểm của làng.

Đến khi Sasuke đau đớn phát hiện người anh mà cậu căm thù muốn giết chết bấy lâu nay đã luôn quan tâm đến cậu, cảm nhận cái chết của anh trai thật oan uổng, cậu đã quyết định trả thù làng Lá vì họ đã tiêu diệt toàn bộ tộc Uchiha và buộc Itachi hành động nghiệt ngã…

… đối với Sasuke, bản thân Itachi còn quan trọng hơn cả ngôi làng…

… thế nên Sasuke đã đồng ý hợp tác với Tobi – Madara, trở thành đồng minh của Akatsuki - điều mà Itachi không mong muốn.